Beas-2B细胞从一位非癌个体的正常人支气管上皮病理切片分离， 经过腺病毒12-SV40杂交病毒感染并筛选克隆建成永生化细胞系 。BEAS-2B细胞保留了对血清反应进行鳞状分化的能力，并用于筛选诱导或影响分化及致癌的化学或生物制剂。PS：细胞角蛋白及SV40抗原染色阳性。

本文为大家介绍BEAS-2B的培养条件及注意事项：

(资料图片)

一、培养条件

【生长特性】 贴壁

【形态特征】上皮细胞样

【培养条件】 BEGM培养基    

【传代比例】1:4传代（培养面积比）,推荐初始密度为1500-3000细胞/CM2，在细胞完全汇合前传代，防止细胞鳞状分化。传代时应严格控制密度，最少不能低于60%，最高不超过80%。

【传代方式】胰酶（0.25%Typsin+0.53 MM EDTA+0.5%POLYVINYLPYRROLIDONE (PVP)）消化2分钟

【换液频率】2~3天换液1次

【冻存液配方】89%BEGM +10%DMSO+1% PVP

二、注意事项

使用无血清培养基BEGM培养，效期2个月。

消化条件：无钙、镁离子的PBS清洗细胞后，加1mL胰酶，胰酶润洗细胞表面3-4次后，吸走胰酶，放入37℃培养箱消化2分钟左右。（具体消化时间请在拿到细胞前2次传代时，及时观察，以实际情况为主。）

终止消化时，用1mL胰蛋白酶抑制剂（2.5mg/mL）终止，离心去上清，然后用3mL PBS再次清洗细胞，离心收集后，用新的培养基重悬后铺板。（消化过程中，不要拍瓶身，振荡可促使细胞聚团。）

注意：80%左右汇合度时传代，完全汇合会使细胞末端分化。

刚复苏要使用提前用包被液包被过的培养器皿（包被液配方：0.01mg/mL黏连蛋白、0.03mg/mL Ⅰ型胶原和0.01mg/mL BSA），以增加细胞贴附。培养器皿提前使用包被液处理，包被时间至少4小时，建议过夜。

包被液使用方法：加2-3mL到T25培养瓶（3-4mL到10cm培养皿），放无菌环境中，拧上盖子，自然风干。

复苏后的传代培养过程中可不做包被处理，细胞可正常贴壁。

三、血清对细胞的影响

用不含血清的培养基培养时，BEAS-2B细胞具有典型的呼吸上皮细胞多边形态；用含血清的培养基培养时，密度低时细胞形态会呈长梭型，但密度高一些以后形态会变短。

★ 通过比较有/无FBS培养的BEAS-2B的全基因组基因表达情况，发现部分生物途径发生了基因表达变化，主要包括致癌和能量代谢有关的途径。

★ 实验实时测量BEAS-2B的氧消耗和糖酵解，发现FBS培养的细胞总糖酵解能力增加了1.4倍，基础呼吸增加了1.9倍，产生ATP所消耗的氧气增加了2.0倍；与不使用FBS培养的BEAS-2B相比，最大呼吸量增加了2.8倍。

★ 43%的亚砷酸盐调节基因在mRNA水平上受到胎牛血清的调节。

★ 细胞毒性研究显示，暴露在5%的FBS中8周的BEAS-2B细胞对亚砷酸盐的细胞毒性的敏感性几乎是不接触FBS的BEAS-2B细胞的5倍。

★ 胎牛血清诱导的BEAS-2B的表型变化表明，在使用BEAS-2B作为砷毒性的实验模型时 ，应仔细考虑培养条件。

【参考文献】

[1] Zhao F ,  Klimecki W T . Culture conditions profoundly impact phenotype in BEAS‐2B, a human pulmonary epithelial model[J]. Journal of Applied Toxicology Jat, 2015, 35(8):945-951.  

DOI:10.1002/jat.3094

[2] Li T, Liu Y, Xu W, et al. Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent apoptosis in acute respiratory distress syndrome[J]. Laboratory Investigation, 2019, 99(6): 819-829. 

DOI:10.1038/s41374-019-0191-3 (此文献Beas-2B细胞购自赛库生物）

[3] Tan H W, Liang Z, Yao Y, et al. Lasting DNA Damage and Aberrant DNA Repair Gene Expression Profile Are Associated with Post-Chronic Cadmium Exposure in Human Bronchial Epithelial Cells[J]. Cells, 2019, 8(8).  

DOI:10.3390/cells8080842 (此文献Beas-2B细胞购自赛库生物）

[4] Li X, Jia Y, Nan A, et al. CircRNA104250 and lncRNAuc001.dgp.1 promote the PM2.5-induced inflammatory response by co-targeting miR-3607-5p in BEAS-2B cells[J]. Environmental Pollution, 2020.  

DOI:10.1016/j.envpol.2019.113749(此文献Beas-2B细胞购自赛库生物）

[5]  Jia Y ,  Li X ,  Nan A , et al. Circular RNA 406961 interacts with ILF2 to regulate PM2.5-induced inflammatory responses in human bronchial epithelial cells via activation of STAT3/JNK pathways[J]. Environment International, 2020, 141:105755.   

DOI:10.1016/j.envint.2020.105755 (此文献Beas-2B细胞购自赛库生物）

关键词：